本产品适用于肺癌类器官的培养与结构功能的维持。利用本产品培养得到的类器官能够有效保留原发肿瘤的组织特性，可广泛应用于肺肿瘤的科学研究实验。

肺癌类器官培养

实验操作流程

1）将KemiGel基质胶恢复至室温或者温育到37℃ 3-5分钟。  

2）组织样本处理

2.1组织清洗 将组织转移至无菌的50 mL离心管中，加入20-30 mL KemiGel组织清洗液，通过手工颠倒或涡旋震荡仪进行清洗3-5次。

2.2组织剪切 取60 mm无菌培养皿放置于冰盒上，将清洗好的样本转移至培养皿中，使用无菌剪刀将组织剪至约1 mm 3-4小块。

2.3组织消化 用组织消化酶将组织消化至松散、大部分组织碎片能够通过1mL移液器吸头时即可。

2.4终止消化  待步骤2.3组织消化完成后，向悬液中加入5 mL无菌Hank's平衡盐溶液终止消化，1,500 rpm离心3 min，弃去上清备用。

2.5组织过滤 在步骤2.4的沉淀中加入5 mL无菌Hank's平衡盐溶液进行重悬，然后使用100 μm细胞筛网进行过滤，收集滤液至50 mL无菌离心管中，1,500 rpm离心3 min，弃去上清收获细胞沉淀。 （可选）红细胞裂解 在步骤2.5收获的细胞沉淀中加入2 mL红细胞裂解液进行重悬，室温（15-25℃）放置2-5 min后，加入4 mL无菌Hank's平衡盐溶液稀释终止裂解，1,500rpm离心3 min，弃上清收获细胞沉淀。 注意：本步骤适用于细胞沉淀中含有较多红细胞时（沉淀呈红色），并可根据红细胞含量适当调整红细胞裂解液用量。

2.6制备细胞悬液 利用细胞计数仪进行计数，使用肺癌类器官完全培养基重悬细胞沉淀，并制备成104-105 cells/30 μL的细胞悬液。 注意：细胞悬液的浓度可根据实验需要适当调整。

2.7细胞接种和培养 2.7.1 用enhancer（不超过200 μL）与步骤2.6的细胞悬液（不超过200 μL）按照1:1的比例充分混匀。 

2.8 用基质胶与步骤2.7.1制备的细胞悬液混合物1:1混合，接种至实验前预热的培养皿中，尽量不要吹打，快速轻轻颠倒一次即可，避免产生气泡。

2.9 将接种完细胞的培养皿放入CO2培养箱内（37℃、5%的CO2浓度）静置2 min，轻晃胶滴无明显流动后小心倒扣，待其充分凝固（约15 min）。

2.10 待胶滴充分凝固后，向培养皿中加入4 mL的乳腺癌类器官完全培养基，置于培养箱内（37℃、5%的CO2浓度）培养。

3. 类器官的培养与照护   接种类器官培养基后的细胞，需密切观察类器官的生长状况，每隔3-4天更换一次乳腺癌类器官完全培养基，一般情况下培养6-12天可得到类器官。根据类器官的生长情况及实验需求，后续进行肺癌类器官传代、冻存、复苏等操作。

4.类器官的传代和冻存

 4.1 准备基质胶消化液，2-8℃储存备用。

4.2  吸出需传代样本培养皿中的培养液，弃掉。

4.3  在步骤4.2的培养皿中加入1-2 mL的基质胶消化液。

4.4  使用基质胶消化液浸润过的1 mL枪头尖口，将步骤4.3的胶滴从皿底彻底刮除。用移液器反复吹打，将胶滴吹散，放入培养箱（37℃、5%的CO2浓度）消化3-10 min。

注意: 1. 建议尽可能将胶滴吹散，避免影响消化效率。 2. 使用吸头吹打时，避免吸头尖端接触到皿底。 3. 对于类器官平均直径小于40 μm及细胞活性不佳的样本应相应缩短消化时间，避免消化过度。 4.将步骤4.4消化好的细胞悬液收集到15 mL无菌离心管中，加入10 mL无菌Hank’s平衡盐溶液，1,000 rpm离心3 min，弃去上清备用。 4.5 有关传代操作的后续步骤参考传统细胞传代方法。

本产品仅用于科学研究，不能用于其他领域