产品储存：-20℃保存，有效期 12 个月。

制品说明：2X F5 FastLong HiFi PCR Mix 包含DNA Polymerase 、dNTP、蛋白稳定剂以及经过优化的缓冲体系。本产品添加了独特的蛋白稳定剂， 使DNA Polymerase的稳定性得到大幅提升，使用时无需置于冰上，常温 操作即可。极致优化的缓冲体系保持了DNA Polymerase的高保真性以及 扩增特异性，进一步提高了扩增产量。此外，FastLong HiFi PCR Mix对PCR抑制剂有 良好的抵抗能力，在细菌、真菌、血液以及动植物组织裂解液等粗品中均具有优异的扩增 性能。本产品使用时只需要加入引物和模板即可进行PCR扩增， 简化的步骤提高了检测通 量及结果的可重现性。本品中的DNAPolymerase具有5‘→ 3’DNA聚合酶活性和3‘→ 5’核酸外切酶活性，其 扩增产物为平末端。

适用范围

本产品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒DNA或粗品为模板的PCR反应。

*反应体系兼容Dpn I酶切，PCR完成后可直接加酶进行酶切。

普通PCR操作流程

反应体系：各组分完全解冻后，可参考如下体系加入不同组分，充分混匀后采用Mini离心机将PCR管 内液体甩到管底

初始变性温度98°C设置为30-60s，之后变性时间在98°C 保持10-15s ，使得酶活处于最佳状态。退火时间为10-30s。对于简单模板如质粒，延伸时间参照30s/1kb设置，对于cDNA或者复 杂基因组模板，延伸时间参照 45s /1kb设置, 但请勿超过1min/kb。

退火温度与引物的Tm值有关， 决定了PCR扩增反应的特异性， 如发现扩增特异性差， 可适当 提高退火温度，当引物Tm值超过69°C，建议删除退火步骤使用两步方案，即使引物Tm>72°C， 仍在72°C下进行退火及延伸。

注意事项：

1. 请使用98°C进行变性。由于反应缓冲液中的盐浓度较高，FastHiFi PCR Mix在较高的变性和退火温度下性能更优。对于大多数模板，建议初始变性步骤在98°C下进行30s-1min，对于一些复杂的模板(如基因组DNA、cDNA )可能需要较长的初始变性时间，时长可延长到3分钟。

2. 延伸在72°C下进行，延伸时间取决于扩增片段的长度和复杂性。对于低复杂性模板(如质粒、λDNA)，建议按照15-30s/1kb的速度计算延伸时间。对于高复杂性模板(如基因组DNA、cDNA模板) 建议按照40s/kb的 速度计算延伸时间，以获得最佳结果，但请勿超过1min/kb。

3. 由于FastHiFi PCR Mix是一种依赖于Mg2+的酶，但过量的Mg2+可以稳定DNA双链，防止DNA完全变性，引发错误模板位点的假退火降低扩增特异性。反之，Mg2+不足也可能导致产物收率降低。最 佳Mg2+浓度取决于dNTP浓度、特定模板DNA和样品缓冲液组成等，如果引物或模板中含有EDTA或EGTA等螯合剂，则Mg2+最佳浓度需要提高，优化时请以0.2 mM的步长增加Mg2+ 浓度。

4. FastHiFi PCR Mix产生平末端的DNA产物。