【产品简介】

KemiGel无血清3D细胞/类器官冻存液是一种无血清细胞冻存液，通用于各种动物细胞株（肿瘤细胞和常规细胞），冻存细胞可在-80℃长期保存（>5年）。配方成分明确，不含动物来源性蛋白，不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。该冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分，提高细胞存活率和活力，亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。

【产品特点】

1、即用型细胞冻存液

2、直接冻存于-80℃冰箱，长期保存（>5年），不需要程序性降温

3、高安全性，病毒、病菌和支原体等污染可能性低

4、细胞存活率和活力高，批次性差异小

【使用方法】

（一）3D细胞/类器官冻存

1、弃置孔中原有的培养基，用PBS清洗每孔2-3次，加入500μl KemiGel基质胶消化液。用1 ml的枪头吹打溶解KemiGel，将类器官悬液转移到15 ml的离心管中，并用500μl KemiGel基质胶消化液收集孔内残余的类器官。

2、然后加入4ml消化液，37℃孵育5-10min后，用移液枪反复吹打类器官（30次），在显微镜下检查类器官碎片大小。加入5 ml PBS终止消化，300 g 离心5min，弃上清。

3、加入12 ml基础培养基重复清洗一次，300 g离心5min。

4、用适量的KemiGel 3D细胞/类器官冻存液重悬类器官，然后将类器官悬液转入冻存管并放入细胞冻存盒，每支500~1000 μl，通常包含2~3个孔的类器官（注：每1ml冻存液推荐冻存 1x103-1x107 个细胞或对应细胞量的类器官）。冻存盒-80℃冰箱存贮过夜，第二天转入液氮罐长期存放。

（二）类器官复苏

1、准备15 ml离心管，加入10 ml的基础培养基。

2、从液氮取出冻存的类器官，37℃水浴快速解冻，用1 ml的枪头轻轻吹打混匀类器官悬液，逐滴缓慢加入准备好的基础培养基中。

3、300 g离心3 min沉淀类器官，弃上清。

4、加入适量的增强系统（Enhancer）重悬类器官，再加入等体积KemiGel基质胶混匀，将Enhancer-胶-细胞悬液加入的24孔板中，每个孔300 μl。然后将24孔板小心放入37℃的细胞培养箱中孵育5-10min后，KemiGell即固化形成水凝胶状态，此时即可加入类器官培养基（24孔推荐每个孔300μl-500 μl），将孔板置于5% CO2的细胞培养箱37℃孵育培养。

【注意事项】

1. 尽量减少反复冻融的次数，以免失效；

2. 在冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入到-80℃超低   温冰箱；

3. 对于干细胞（ES细胞）等冻存时，我们建议用户在使用前，事先 对所冻存的胞进行至少为期1周的该产品试验性细胞冷冻保存培养，确认性能后再进行正式冻存；

4. 产品含有10% DMSO，部分对DMSO敏感的细胞，建议对其进行至少1周的本产品试验性的细胞冻存培养，确认性能后再正式冻存；

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【储存】4℃

【有效期】24个月

【生产日期】见包装盒