1. 适用范围
适用于快速提取植物组织总蛋白,可以用于蛋白电泳、Westernblot 等下游实验。
2. 产品规格
存储条件:室温。
3. 产品介绍
1、称取50-100mg 的植物组织于 1.5mL 离心管中,加入 200μL 的裂解液PBT,用研磨棒将植物组织磨碎混匀,冰上放置 10 分钟;
2、将过滤柱放入收集管中,将步骤 1 中的匀浆液加到过滤柱中,约13000rpm 离心 5 分钟,收集滤液;
3、向滤液中加入等体积的溶液 PB1,漩涡震荡 20 秒,13000rpm 离心5分钟,溶液分层,去掉上层溶液;
4、加入1mL 的预冷试 PB2,-20℃放置 10-20 分钟,如果植物组织过少,可以延长过夜放置;13000rpm 离心10 分钟,弃上清;
5、 加入500μL 预冷试剂四,涡旋混匀,13000rpm 离心5 分钟,弃上清;
6、重复步骤 5;
7、室温开盖静置 5-10 分钟,风干,沉淀即为蛋白干粉;
8、用合适的缓冲液溶解沉淀,推荐使用 Tris-Cl(pH8.8),或者 1×SDS-PAGE上样缓冲液直接溶解进行电泳测试。
注:由于各种蛋白的等电点不同,所以溶解度也不同。如果想全部溶解需要使用PH 较高的溶液溶解或者使用带有去污剂(巯基乙醇、DTT 或者SDS) 的溶液溶解。