产品介绍

BCA（Bicin-choninic Acid）蛋白定量法是目前广泛应用的蛋白定量方法之一，可实现对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。该定量的原理是在碱性介质中，蛋白质可将 Cu2+还原成Cu1+的反应，然后使用含有 BCA 的独特试剂，利用比色法检测 Cu1+，形成一种在 562nm 处有强

吸收值的紫色复合物。通过与标准品曲线对比，获得带测定蛋白的浓度，具有高灵敏度和高选择性的特点。

产品特色

1、不受蛋白质种类的影响，在 0.02-2mg/ml 浓度范围内蛋白质浓度与吸光值成线性关系

2、对表面活性剂的干扰影响小

3、蛋白浓度测定简单、显色速度快和稳定性好

操作步骤

1、稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。

2、配制 BCA 工作液：

a.计算 BCA 工作液总量：

BCA 工作液总量=（BAS 标准品样本个数+未知样本个数）X 复孔数 X 每个样本 BCA 工作液体 积。

b. 根据计算出的 BCA 工作液需要总量，将 BCA-A Solution 和 BCA-B Solution 按照 50:1 的体积比，配制 BCA 工作液，充分混匀。

3、定量检测：

    ① 按上表，将稀释好的 A-G BSA 标准品和待测蛋白样品各 25ul 分别加入到作好标记的 96孔微板孔中，推荐每个待测的样本做 2-3 个平行反应。(根据样品的浓度，可提前稀释 5 倍 或 10 倍)

    ② 每孔加入 200ul BCA 工作液，充分混匀，盖上 96 孔板盖，37 度孵育 30 分钟，冷却至室温，在 3-5 分钟内完成检测。

    ③ 使用分光光度计或酶标仪测定 562nm 处的每个样品及 BSA 标准品的吸光值，同时做好记录。

    ④ 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

保存条件

注意事项

1、本产品可以采用分光光度计或酶标仪测定蛋白浓度

2、建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，获得更准确数据

3、BSA 标准品稀释液需和待测样品的稀释液一致

4、BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随时间的延长不断加深，并且显色反应会因浓度升高而加快，如果浓度较低，适合的较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

5、建议去除背景值后的吸光度值读数绘制标准曲线，由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。

6、如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。