糖(sugar)在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。该法几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在 λ 620 nm处有最大吸收峰,故在此波长下进行比色。

1 试剂

1100 μg/ml葡萄糖标准溶液

2)蒽酮试剂

2 实验方法

        2.1 标准曲线的绘制

6支具塞试管置于冰水中,按下表加入各试剂,迅速混合均匀后,在沸水浴中煮沸10 min,立即取出置于冰水中冷却。以0号试管为空白对照,在 λ 620 nm下测定吸光度。以葡萄糖含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。


2.2 样品前处理

称取0.2 g样品置于预冷的研钵中,分三次加入6 ml2 ml2 ml2 ml)预冷的蒸馏水,在冰浴上研磨成匀浆,转入具塞试管中,再加入9 ml蒸馏水,在沸水浴中煮沸20 min,取出置于冰水中冷却,过滤并定容至25 ml,即为糖提取液。

        2.3 测定方法

吸取1 ml提取液(用蒸馏水适当稀释后)放入具塞试管中并置于冰水里,然后加入5 ml蒽酮试剂,迅速混合均匀后,在沸水浴中煮沸10 min,立即取出置于冰水中冷却。以0号试管为空白对照,在 λ 620 nm下测定吸光度,通过标准曲线方程查得可溶性糖含量。

        2.4 计算公式

其中:

可溶性糖含量以百分数表示(%);

C为查标准曲线值(μg);

Vt为提取液总体积(ml);

Vs为测定时提取液用量(稀释前)(ml);

W为样品鲜重(g)。