当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后,茚三酮与脯氨酸发生反应,溶液变为红色,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 λ 520 nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。

1 试剂

13% 磺基水杨酸溶液

22.5% 酸性茚三酮溶液

310 μg/ml脯氨酸标准溶液

4)冰醋酸

5)甲苯

2 实验方法

        2.1 标准曲线的绘制

7支具塞试管,按下表加入各试剂,迅速混合均匀后,在沸水浴中煮沸30 min,立即取出置于冰水中冷却。冷却后准确加入4 ml甲苯,剧烈振荡30s以萃取红色物质,静置片刻后,用吸管轻轻吸取上层脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0号试管为空白对照,在 λ 520 nm下测定吸光度。以脯氨酸含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线


2.2 样品前处理

称取0.2 g样品置于预冷的研钵中,分三次加入6 ml2 ml2 ml2 ml)预冷的3%磺基水杨酸溶液,在冰浴上研磨成匀浆后,转入具塞试管中,在沸水浴中煮沸10 min(提取过程需经常摇动),取出置于冰水中冷却,过滤到干净的试管中,滤液即为脯氨酸提取液

       2.3 测定方法

1)吸取2 ml提取液放入具塞试管中,然后加入2 ml冰醋酸和2 ml 酸性茚三酮溶液,迅速混合均匀后,在沸水浴中煮沸30 min,立即取出置于冰水中冷却。

2)冷却后准确加入4 ml甲苯,剧烈振荡30s以萃取红色物质,静置片刻后,取上层溶液至离心管中,4000 r/min离心5 min

3)用吸管轻轻吸取上层脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0号试管为空白对照,在 λ 520 nm下测定吸光度,通过标准曲线方程查得脯氨酸含量

        2.4 计算公式

其中:

脯氨酸含量以以每微克每克鲜重表示(μg/g·FW);

C为查标准曲线值(μg);

Vt为提取液总体积(ml);

Vs为测定时提取液用量(ml);

W为样品鲜重(g)。