脂肪酸在生物中广泛存在,脂肪酸的检测是生物研究者常做项目,我们利用GC-MS联用技术开发了脂肪酸检测方法,该方法比同行中常用的方法存在以下优势:需要样品量较少、灵敏度高、检出限低、可用于微量或痕量分析、数据准确。

1.样本液氮研磨

先用液氮预冷所有试验器材,将样本置于研钵中,加入适量液氮,戴上防冻手套,进行研磨处理。待样本研磨成均匀粉末状物质后,将其转移至EP管中,-20℃冰箱冷冻保存。

2. 试样的称取

样品溶液的制备:称取均匀试样0.1g0.2g(精确至0.1㎎)移入到15ml的离心管中,准确加入10ul壬酸甲酯内标溶液。加入10ul质量比为4/mlBHT甲醇溶液,涡旋混匀1min90℃下衍生30min,取出放置室温,加入2ml正己烷,加入2ml饱和氯化钠溶液,涡旋1min后,静置15min后取上清液分析。

3.气相色谱质谱联用分析条件为毛细管柱采用HP-5毛细管色谱柱,载气为氦气,进样体积为1 μL;进样口温度:270℃分流比100:1升温程序:初始温度55℃,保持1min55℃205℃,升温速率5℃/min,保持5min205℃240℃,升温速率5℃/min,保持10min;离子源温度,230℃,四极杆温度150℃,溶剂延迟3min,检测范围:30-500Da,选择离子监视方式(SIM)定量,SIM离子:74,55,67,79,87,69,105