1、技术原理 
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最近几年新出现的一种基因组编辑工具，它能够完成RNA导向的DNA识别及编辑。与ZFN和TALEN技术相比，CRISPR/Cas9技术更易于操作，具有更强的可扩展性。CRISPR技术使用一段序列特 异性向导RNA分子（sequence-specific guide RNA，sgRNA）引导高度保守的CRISPR相关基因（Crispr- associated gene, Cas gene, Cas9）编码的核酸内切酶，到靶位点处对DNA序列进行特异性的切割，并引入单个或多个碱基的插入或缺失突变，从而完成基因组的编辑。目前，CRISPR/Cas9系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种模式生物，包括拟南芥、烟草、水稻等植物、人、小鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫及细菌。

2、技术优势
1)使用AtU6启动子，广泛适用于拟南芥、烟草等对双子叶植物。
2)对靶基因实现精准编辑，引起DNA的插入缺失和替换。
3)载体构建简单，周期短，使用方便，而且成本较低。
3、应用领域
1)广泛应用于基因的功能和调控研究，也可以加快动植物新品种的培育。
2)利用其打靶精确而高效的优势，可将其应用于人类基因治疗、新药开发等生物医学研究领域，针对目前人类所高发的重大疾病(例如癌症、传染病、遗传病以及自体免疫性疾病等)开辟新的治疗途径，并且为临床上的个性化治疗提供方便。
4、技术路线及时间周期

5、实施方案
（1）靶序列分析、合成及CRISPR/Cas9载体构建
     详细操作参照第四个实验中CRISPR/Cas9载体构建中的操作。
（2）烟草遗传转化
     详细操作参照第五个实验基因转化-过表达/RNAi中的操作。
6、服务分项内容    周期    验收标准
gRNA设计合成    5个工作日    分析报告
植物CRISPR/Cas9载体构建    10个工作日    测序报告
烟草遗传转化    2-3个月    植株DNA PCR扩增目的基因电泳图特异条带
炼苗移栽（可选）    15个工作日    -
收获T1代种子（可选）    加速生长周期    -
靶基因扩增测序    5个工作日    测序报告