1 技术原理
基因克隆（Gene cloning）或分子克隆又称为重组DNA技术，是应用酶学方法在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重组在一起，并使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代DNA分子的过程。
2 技术优势
基因克隆周期短，遗传性状稳定。克隆技术是人类科学技术上的一大进步，有突破性意义，目前已经体现出诸多技术优势，在许多领域实现了广泛应用。
3 应用领域
（1）发现新基因；（2）载体构建；（3）基因编辑；（4）基因突变。
4 技术路线及时间周期

5 实施方案
（1）引物设计
若克隆的目的基因是已知基因，可以依据基因组序列设计相应的特异性引物；若克隆的目的基因是未知基因，则需要参照与该基因同源性较高的其他已知基因的序列，设计多对简并性引物进行PCR扩增。
（2）总RNA的提取
根据试剂盒操作说明书，利用RNA提取试剂盒提取总RNA。
（3）RNA质量检测
RNA纯度的检测：使用分光光度计测定OD260/OD280的值，当其比值在1.8-2.0之间，说明提取的总RNA纯度比较高，没有蛋白质和基因组的污染。
RNA完整性的检测：取2 μL RNA，与2 μL溴酚蓝混匀，用1%的琼脂糖进行凝胶电泳，120 V电泳20 min后，在凝胶成像系统中观察结果。当26S与18S条带清晰，且亮度比大约是2:1，5S条带若隐若现，而且没有其它条带时，说明完整性好，可以用于逆转录实验。
（4）逆转录PCR（Reverse Transcription PCR, RT-PCR）
根据试剂盒操作说明书，利用逆转录PCR试剂盒进行操作。
（5）PCR产物的回收
PCR反应得到目的条带后，根据胶回收试剂盒说明书进行目的片段的回收。
（6）PCR产物的连接和转化
按照连接试剂盒说明书进行操作，将PCR目的片段与T载体连接，转化感受态细胞，将菌液均匀涂布于含Amp的LB固体培养基平板上，37℃培养箱中正放1 h，待菌液被琼脂完全吸干后，倒置平板，过夜培养。
（7）菌液PCR检测
在平板上挑取5-10个白色菌落，加入含有Amp的1 mL LB液体培养基，37℃震荡培养6 h。3000 rpm离心3 min，吸掉400 μL上清液，短暂涡旋将沉淀打散，然后把菌液当成模板，使用目的基因的引物进行PCR扩增。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测是否含有目的条带。挑选扩增出正确目的条带的菌液送生物公司测序。
（8）序列比对分析
将测序结果在NCBI数据库中进行序列比对，以判断是否为所需的目的片段序列。