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KR0501-50 | All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)(第一链式反转录)

货号: KR0501-50


名称: All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)(第一链式反转录)


规格:  50T | 100T

¥1000

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储存条件

储存于-20℃,有效期一年。



产品介绍

KEIris RT mix with DNase(All-in-One)是将 RNA 合成

cDNA 的一个操作更为简便的系统,含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂,仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应,操作非常方便。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推荐用于qPCR 反应。

该预混液采用特制的高效 DNase,该酶具有热敏感性, 可在高温条件下快速不可逆地失活,因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因组 DNA 污染与逆转录反应,与使用DNase I 去除基因组 DNA 污染相比,无需额外加入 EDTA 进行失活,不仅减少了对 RNA 模板的损伤、降低 RNase 污染风险,而且节省实验时间。

1. 在冰浴的无核酸酶的离心管中配制下列逆转录体系:


组分

体积

KEIris 5× RT All-in-One Mix

4 μL

dsDNase

1 μL

模板 RNA

50 ng - 1 μg

RNase-free water

加至 20 μL

注:推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。

2. 轻轻混匀,瞬时离心(使液体沉于底部);

3.  在PCR 仪上进行下列条件的反应: 37℃温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染; 55℃,温育 15 min;

85℃,孵育 5 min,以终止反应

4. 将获得的产物迅速置于冰上或立即保存于-20℃,用于后续实验。


注意事项

1. RNA 模板的纯度和完整性是影响逆转录效果的重要因素, 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等杂质会使 RNA 降解。

2. 若后续实验为 qPCR,逆转录产物的加量应不超过 PCR 体系终体积的 1/10,如 20 μL PCR 反应体系,逆转录产物的加量应不超过 2 μL。

3. 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,也适用于不含

Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。